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实验接种操作中常见问题汇总及分析

发布时间：

2023-11-18 14:51

来源：

记住下面这十条小诀窍让您在实验接种操作中轻松实验！

一、划不出单个菌落怎么办？

（1）平板上有过多的水分。

（2）划线时接种环未经反复灼烧。

（3）多区划线，三区或四区划线。

 

二、培养基配制时应注意的问题

（1）灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。

（2）琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。

（3）培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。

（4）含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。

 

三、平板的保存

大多数平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。

 

四、产品的保存

（1）干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。

（2）亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。

（3）抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。

（4）兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。

 

五、观察时间的掌握

按GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察，时间过短或时间过长，单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基，时间短单菌落看不到卵磷脂环，时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。PALCAM的观察也如此，时间过长，李氏菌使整个平板成黑色，不利于观察单个菌落。

 

六、添加剂的添加

（1）温度的掌握。卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。

（2）定量。过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。

 

七、培养温度的掌握

（1）真菌类。25-28℃培养。

（2）细菌类。李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右。

 

八、接种方法

常用的方法主要有划线、三点接种、穿刺接种、倾注接种、涂布接种、液体接种。

 

九、革兰氏染色方法

染色时间的掌握、冲洗的方法。

 

十、生化实验

（1）接种的方法。

（2）氧化型和发酵型实验操作。

（3）阳性菌种的对照。

（4）接种前的纯化。挑取单个菌落进行一系列的生化。

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